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新一代三重四杆质谱仪TSQ Fortis检测二甲双胍中的NDMA

赛默飞世尔科技(中国)有限公司   发布时间:2021/8/25 10:15:38

关键词:
二甲双胍 NDMA TSQ Fortis
摘要
针对二甲双胍中的基因毒性杂质NDMA,基于赛默飞液相色谱串联三重四杆质谱TSQ Fortis建立了稳定灵敏的分析方法。该方法使用大气压化学电离源(APCI)进行有效检测
分析,在适宜的浓度范围内线性关系良好(r2>0.99)。2ng/mL浓度水平重复性试验结果良好。该方法稳定快速,灵敏度能满足二甲双胍中微量基因毒性物质NDMA的日常分析要求。

引言
二甲双胍为用单纯饮食控制及体育锻炼治疗无效的2型糖尿病,特别是肥胖的2型糖尿病,且与胰岛素合用,可减少胰岛素用量,防止低血糖发生、与磺酰脲类降血糖药合用,具协同作用。NDMA等基因毒性杂质是指化合物本身直接或间接损伤细胞DNA,产生致突变和致癌的物质。特点是在很低的浓度时即可造成人体遗传物质的损伤,进而导致基因突变并可能促使肿瘤发生。因其毒性较强,对用药的安全性产生了强烈的威胁。
已上市药品中发现痕量的基因毒性杂质残留而被召回的案例,时有发生,给药厂造成了巨大的经济损失。近期,据报道美国FDA正在检测二甲双胍中可能含有的致癌物。新加坡、欧洲药品监管部门也已经对二甲双胍中NDMA的含量进行了检测。新加坡卫生科学管理局宣布二甲双胍中NDMA可能高于“国际可接受水平”后,已经召回了在新加坡销售的46种二甲双胍药品中的3种。欧洲药品管理局(EMA)也表示,正在对二甲双胍样本进行NDMA检测,EMA在一份声明中表示:“尽管目为止发现的NDMA风险非常低,但药物中应避免NDMA等杂质,如果发现NDMA水平高于一定要求,有关部门将采取必要行动”。
 
基于上述检测需要,本文建立了基于Thermo Fisher Scientific TSQ Fortis三重四杆串联质谱仪分析二甲双胍中的NDMA高灵敏度检测方法,定量限为1ng/mL。本方法重现性好,线性范围宽,适于进行二甲双胍中NDMA的日常分析检测。

1.实验部分
1.1 仪器与试剂
1.1.1 Thermo Fisher Vanquish Binary Flex液相色谱仪1.1.2
Thermo Fisher TSQ Fortis三重四杆质谱仪
1.1.3 Thermo Scientific Hypersil GOLD Phenyl色谱柱(P/N:25903-104630)
1.1.4 甲醇,LCMS(Fisher A456-4)
1.1.5 乙腈,LCMS(Fisher A955-4)
1.1.6 水,LCMS(Fisher W6-4)
1.1.7 甲酸,LCMS(Fisher A117-50)
1.1.8 Titan3, 17mmPVDF过滤器,0.22um(P/N:42213-PV)
1.2 样品处理
1.2.1 NDMA标准品储备液
NDMA标准品,纯度98.5%
 
用超纯水配置NDMA标准品溶液,并用水稀释至100 ng/mL作为标准品储备液

1.2.2 灵敏度溶液
精密量取对照品溶液适量,定量稀释制成每1mL中含1ng的溶液。
1.2.3供试品溶液制备
取本品药片(或胶囊)细粉适量,精密称定,至50 mL离心管中,精密加入甲醇10mL,涡旋混匀1 min,震荡20 min,以4500转/分的速率离心10分钟,取上清液滤过,取续滤液即得。
1.3 色谱条件
本实验中采用Thermo Scientic Hypersil GOLD Phenyl HPLC分析柱,高载量,峰型好,对NDMA有较好的保留,和API可以做到有效分离。该分析柱基于高纯硅胶设计,用于解决诸多色谱难题,包含C4连接基团,具备中等疏水性,与芳香族化合物具有加强的 pi-pi 相互作用,具有出众的峰形和灵敏度,特别适合苯环和芳环化合物的分析,对芳环分析物具有出众的保留能力和独特的选择性。
1.4 质谱条件
本实验采用新一代Thermo Scientic TSQ Fortis三重四杆质谱仪,该质谱仪具备较高的耐用性,通过主动离子管控技术(AIM+)和基质分离离子引导(MSIG)保持离子路径清洁,确保系统更长时间正常运行;配合多款液相色谱实现日常高通量定量分析。

2实验结果
2.1 结果谱图
采用上述仪器条件,在LOQ浓度条件下,NDMA可得到良好峰型,满足FDA(FY20-006-DPA-S)灵敏度要求。
2.2 线性范围及系统适应性测试
配制浓度为1、2、5、10、50、100 ng/mL的标准溶液,采用上述仪器条件进行检测,所得标准曲线线性关系良好,相关系数R2 大于0.99。按照FDA法规进样顺序要求,序列中初始6针
标准品溶液(2 ng/mL)相对标准偏差为6.01%,整个序列中准品溶液偏差小于5%。原料药样品中NDMA的保留时间与标准品偏差小于2%,经测定原料药样品中NDMA的浓度为1.8 ng/mL。


 
结论
本文建立了基于三重四杆质谱TSQ Fortis检测二甲双胍中基因毒性杂质NDMA的方法,该方法的灵敏度及重现性可以满足FDA要求;实际样品检测时NDMA可与主成分有效分离,确保结果准确性。同时,针对制药行业仪器控制及数据处理软件合规性要求,所有数据采用符合法规要求的Chromeleon软件进行处理,从而可为用户提供NDMA检测的完整解决方案。

参考文献
1. FY20-006-DPA-S_Liquid Chromatography-Tandem Mass Spectrometry (LC-MS/MS) Method for the Determination of NDMA in Ranitidine Drug Substance and Solid Dosage Drug
Product (https://www.fda.gov/media/131868/download)
2. FY19-177-DPA-S_ Liquid Chromatography-High Resolution Mass Spectrometry (LC-HRMS) Method for the Determination of NDMA in Ranitidine Drug Substance and Drug Product(https://www.fda.gov/media/130801/download)

阅读人数:43 原创作者:赛默飞世尔科技(中国)有限公司

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